Только для IN VITRO диагностики!
- Кат.№ С053.1.100 - 100 определений при конечном объеме пробы 1,2 мл.
Принцип метода:
В результате взаимодействия исследуемого образца с полианионными и амфотерными детергентами, входящими в состав Реагента 1, происходит связывание ЛПНП, что делает их недоступными для взаимодействия с холестеролэстеразой. Остальные фракции липо-протеинов (хиломикроны, ЛПОНП и ЛПВП) подвергаются ферментативной деградации с участием холестеролэстеразы, холестеролоксидазы и каталазы с образованием бесцветных продуктов реакции.
При добавлении в реакционную смесь Реагента 2 происходит ингибирование каталазы и разрушение комплекса Детергенты-ЛПНП, что делает холестерин-ЛПНП доступным для взаимодействия с холестеролэстеразой. Далее опреление проводится по следующей схеме:
ЛПНП-холестерин + Н2О - холестеролэстераза → холестерин + жирные кислоты
Холестерин + О2 - холестеролоксидаза → холест-4-ен-3-ен-он + Н2О2
2Н2О2 + 4-AAП + ГСДА + фенол - пероксидаза → квининомин + 4Н2О
Где: 4-ААП – 4-аминоантипирин, ГСДА- гидроксисульфопропилдиметилоксианилин.
Концентрация квининомина, определяемая фотометрически при λ = 578 (600) нм, пропорцио-нальна концентрации ЛПНП холестерина в исследуемом образце.
Исследуемый материал:
Сыворотка или гепаринизированная плазма крови. Гемолиз недопустим. Образцы стабильны при температуре -20°С в течение 5 суток. Избегать повторного замораживания и оттаивания образца.
Состав набора и условия хранения:
- Реагент 1, рН 6,8, 90 мл
- Good’s буфер;
- Холестеролэстераза;
- Холестеролоксидаза;
- Каталаза;
- ГСДА ;
- Детергенты и стабилизаторы.
- Реагент 2, рН 7,0, 30 мл
- Ингибитор каталазы;
- 4-ААП;
- Пероксидаза.
- Детергенты и стабилизаторы
- Калибратор ( лиофилизат) – 1,0 мл.
Реагенты 1 и 2 готовы к использованию и стабильны в течение 12 месяцев при температуре 2-8°С в темноте. Лиофилизат калибратора перед использованием необходимо растворить в 1,0 мл дистиллрованной или деионизованной воды. Раствор калибратора готов к использованию через 30 минут после начала растворения и стабилен в течение 7 суток при температуре 2-8°С. Концентрация ЛПНП-холестерина в полученном растворе калибратора указана на этикетке. Дата изготовления, серия, номер по каталогу и срок годности указаны на упаковке набора.
Аналитические характеристики набора:
- Линейность - 0,02-10,34 ммоль/л;
- Коэффициент вариации - 5 %.
Процедура анализа:
Внести в кювету | Микроанализ | Полумикроанализ | Макроанализ |
---|---|---|---|
Реагент 1, мкл | 270 | 450 | 900 |
Исследуемый образец или калибатор мкл | 3 | 5 | 10 |
Смешать и инкубировать 5 минут при температуре 37°С . По окончании инкубации измерить оптическую плотность (Е1) при λ = 578 (600 нм), d= 1 см против воздуха. | |||
Реагент 2 , мкл | 90 | 150 | 300 |
Смешать и инкубировать точно 5 минут при температуре 37°С. По окончании инкубации измерить оптическую плотность (Е2) при λ = 578 (600 нм), d= 1 см против воздуха. Расчитать ΔЕ = Е2 –Е1. |
Расчет:
Референтные пределы:
- Норма: <3,9 ммоль/л
- Группа риска: 3,9-4,9 ммоль/л
- Патология: > 4,9 ммоль/л
Наименование набора реагентов | ХОЛЕСТЕРИН |
Тип анализатора (полуавтомат/автомат) | любой |
Метод измерения | 2-точечная кинетика |
Длина волны, нм | 578 (600) |
Измерение против | воздуха |
Температура реакции, °С | 37 |
Фактор | - |
Концентрация стандарта | указана на флаконе |
Соотношение реагент1/ проба/Реагент2 (мкл/мкл/мкл) | 270:3:90 |
Количество измерений, не менее | 1 |
Время инкубации № 1, сек | 300 |
Время инкубации № 2, сек | 300 |
Единицы измерения | ммоль/л |
Границы линейности | 0,02-4,65 |