Принцип метода [1]:
р-нитрофенилфосфат + Н2О ← Щелочная фосфатаза → р-нитрофенол + фосфат
Скорость образования р-нитрофенола пропорциональна активности щелочной фосфатазы .
Исследуемый материал [2]:
Сыворотка крови. Образцы после немедленного охлаждения, стабильны при температуре 2-8ºС в течение 48 часов. Замораживание образцов недопустимо.
Состав набора и условия хранения:
- Глициновый буфер, 50 ммоль/л, рН 10,4, 80 мл:
- Субстрат: р-нитрофенилфосфат, 6 ммоль/л, 20 мл;
- NaOH, 200 ммоль/л; 100 мл;
- Калибратор - р-нитрофенол, 50 мкмоль/л, 10 мл.
Компоненты набора №№ 1, 2 и 4 содержат готовые к использованию реагенты, стабиль-ные в течение года при температуре 2-8ºС. Дата изготовления, серия, срок хранения и номер набора по каталогу указаны на упаковке.
Раствор NaOH следует развести бидистиллированной водой, свободной от карбонатов, в соотношении 1:9. Хранить в пластиковой герметичной таре.
Аналитические характеристики набора:
Линейность - от 6 до 120 МЕ/л;
Коэффициент вариации - не более 7%.
Приготовление рабочего реагента:
Смешать необходимое количество буфера и раствора субстрата в соотношении 4:1. Полученный реагент стабилен 10 дней при 2-8 ºС в темноте.
Процедура анализа:
| Поместить в пробирки | Опытная проба, мл | Контроль на реактивы для пробы, мл | Калибратор, мл | Контроль на реактивы для калибратора, мл |
|---|---|---|---|---|
| Рабочий реагент | 0,2 | 0,2 | – | – |
| Сыворотка крови | 0,02 | – | – | – |
| Смешать и инкубировать в водяной бане при 37 ºС 30 мин | ||||
| NaOH, 20 ммоль/л | 2,0 | 2,0 | 1,62 | 2,2 |
| Сыворотка крови | – | 0,02 | – | – |
| Калибратор | – | – | 0,6 | – |
| Смешать. Измерить оптическую плотность пробы (Е пробы) и калибратора (Е калибратора) против соответствующих контролей на реактивы при λ = 405 (400-420) нм и d = 1 см. Окраска стабильна не менее 30 минут после окончания инкубации при предохранении от прямого солнечного света. При активности щелочной фосфатазы, превышающей 120 МЕ/л, исследуемый образец следует развести физиологическим раствором. При расчете активности учесть степень разведения. | ||||
Расчет:
Референтные пределы [2]:
17 - 50 МЕ/л.
Диагностическая информация [2]:
↑. При заживлении переломов; первичный и вторичный гиперпаратиреоидизм; остеомаляция; ювенильный рахит; метастазы рака в кости; остеогеннная саркома; миеломная болезнь; лим-фогранулематоз с поражением костей; болезнь Гоше с резорбцией костей; болезнь Педжета; синдром Кушинга; уремическая остеодистрофия; поражение почечных канальцев, сочетающееся с потерей фосфатов и/или кальция и приводящих к рахиту с вторичным гиперпаратиреоидизмом или без него; "почечный рахит", обусловленным витамин-D-резистентным рахитом, сочетающимся с вторичным гиперпаратиреоидизмом; инфекционный мононуклеоз; неосложненный внепеченочный холестаз; цитомегаловирусная инфекция у детей; холангит и холангиолит, гепатоцеллюлярный некроз с желтухой или без нее; портальный цирроз; абсцесс печени; первичная гепатоцеллюлярная карцинома; вторичный рак; активная регенерация (пролиферация гепатоцитов или желчных протоков); печеночные узелки (метастазы опухоли, кисты, паразиты, амилоид, туберкулез, саркоидоз, лейкемия); гепатиты, вызванные инфекцией, химикалиями, лекарствами, сердечной недостаточностью; хроническое употребление противосудорожных средств; внепеченочный сепсис; язвенный колит; регионарный энтерит; кишечные бактериальные инфекции; тиреотоксикоз; доброкачественная переходящая гиперфосфатаземия; инфаркт легкого и почки; панкреатит, присутствие изоферментов Реган или Нагао; прием фенитоина и алкоголя; индукция фермента.
↓. Гипотиреоидизм; цинга; выраженная анемия; квашиоркор; ахондроплазия; кретинизм; накопление радиоактивных веществ в костях; гипофосфатаземия; врожденная гипофосфатаземия; дефицит витамина В12 (пернициозная анемия); недостаток цинка и магния в пище.
Литература:
- Bessey O.A., J..biol.Chem. 1946, vol.164., p.321.
- Энциклопедия клинических лабораторных тестов (под ред. Н.У.Тица). "Лабинформ", Москва,1997, стр. 525-526.
Параметры программирования
| Наименование набора реагентов | ЩЕЛОЧНАЯ ФОСФАТАЗА КТ |
| Тип анализатора (полуавтомат/автомат) | полуавтомат |
| Метод измерения |
КТ |
| Длина волны, нм | 405 (400-420) |
| Измерение против | реагент бланка |
| Температура реакции, ºС | 37 |
| Фактор | - |
| Концентрация стандарта | 50 |
| Соотношение реагент/ проба (мкл/мкл) | - |
| Количество измерений, не менее | 1 |
| Время преинкубации, сек | - |
| Время реакции, сек | - |
| Единицы измерения | МЕ/л |
| Верхний предел реагент бланка, А | - |
| Нижний предел реагент бланка, А | - |
| Максимальное ΔЕ/мин | - |
| Границы линейности | 6-120 |
| Максимум нормы | 50.0 |
| Минимум нормы | 17.0 |
| Подтверждение линейности (да/нет) | нет |
