Только для IN VITRO диагностики!
- Кат.№ 313.2.400 - 400 определений (при кон. объеме пробы 3 мл)
- Кат.№ 313.2.1000 - 1000 определений (при кон. объеме пробы 3 мл)
Принцип метода[1]:
L-аспартат + α-кетоглутарат ← АСТ → оксалоацетат + L-глутамат Количество образовавшегося в ходе ферментативной реакции оксалоацетата определяется на основе его реакции с 2,4-динитрофенилгидразином (2,4-ДНФГ), результатом которой является окрашенный комплекс, имеющий максимум поглощения при длине волны 537 нм.
Исследуемый материал[2]:
Сыворотка крови. Гемолиз недопустим. Исследование должно быть проведено в день забора образца, так как активность АСТ снижается независимо от температуры хранения.
Состав набора и условия хранения:
- Буфер-субстратная смесь (БСС), рН 7,4:
Na2HPO4 - 100 ммоль/л;
L-аспартат натрия - 100 ммоль/л;
α-кетоглутарат - 2 ммоль/л. - 2,4-ДНФГ - 1 ммоль/л;
- Калибратор - пируват натрия - 1 ммоль/л;
- NaOH (концентрат) - 4 моль/л.
Компоненты набора №№ 1, 2 и 3 содержат готовые к использованию реагенты, стабильные в течение года при температуре 18-25*С. Дата изготовления, серия, срок хранения и номер по каталогу указаны на упаковке набора.
Раствор NaOH следует развести бидистиллированной водой, свободной от карбонатов, в соотношении 1:9. Хранить в пластиковой герметичной таре.
Аналитические характеристики набора:
Линейность - от 1,67 до 66,8 МЕ/л или от 0,1 до 4 ммоль/л в час или от 0,028 - 1,112 мкмоль/л в секунду;
Коэффициент вариации - не более 10%.
Приготовление рабочего реагента:
Смешать буфер и раствор НАДН в соотношении 9:1. Рабочий реагент стабилен не менее 21 дня при температуре хранения 2-8*С в герметично закрытом флаконе.
Процедура анализа:
Поместить в пробирки | Опытная проба, мл | Контроль на реактивы для пробы, мл | Калибратор, мл | Контроль на реактивы для калибратора, мл |
---|---|---|---|---|
БСС | 0,25 | 0,25 | 0,25 | 0,3 |
Сыворотка крови | 0,05 | — | — | — |
Калибратор | — | — | 0,05 | — |
Смешать и инкубировать в водяной бане при 37 С 60 мин | ||||
2,4-ДНФГ | 0,25 | 0,25 | 0,25 | 0,25 |
Сыворотка крови | — | 0,05 | — | — |
Смешать и инкубировать при 18-25º 20 мин | ||||
0,4 моль/л NaOH | 2,5 | 2,5 | 2,5 | 2,5 |
Смешать и инкубировать при 18-25 5 мин | ||||
λ = 540 (500-560) нм; d = 1 см; Измерить оптическую плотность пробы (Е пробы) и калибратора (Е калибратора) против соответствующих контролей на реактивы. Окраска стабильна не менее 30 минут после окончания инкубации при предохранении от прямого солнечного света. При активности АСТ, превышающей 4 ммоль/л в час (1,112 мкмоль/л в секунду), образец следует развести физиологическим раствором. При расчете активности учесть степень разведения. |
Расчет
Референтные пределы | 2,0 - 11,84 МЕ/л |
---|---|
0,12 - 0,71 ммоль/л в час или | |
0,034 - 0,200 мкмоль/л в секунду. |
Диагностическая информация[2]:
↑↑. Скоротечные формы гепатитов, особенно вирусного происхождения.
↑. Некроз клеток печени или их повреждение любой этиологии, алкогольный гепатит (АСТ обычно > АЛТ), вирусные и хронические гепатиты (АЛТ обычно > АСТ, при АСТ > АЛТ - плохой прогноз), метастазы в печень и гепатома, инфекционный мононуклеоз, некроз или травма сердечной или скелетной мышцы, воспалительные заболевания сердечной или скелетной мышцы, после острого инфаркта миокарда АСТ>АЛТ, тяжелая физическая нагрузка, сердечная недостаточность, тяжелые ожоги, болезнь Форбса (только у детей), тепловой удар (в среднем в 20 раз выше нормы), гипотиреоидизм, обструкция кишечника, молочно-кислотный ацидоз, болезнь легионеров, злокачественная гипертермия, посткомис-суротомный синдром, ревматическая полимиалгия, тифоидная лихорадка, большая талассемия, болезнь фон Гирке, синдром токсического шока.