Назначение
Набор реагентов для окраски на амилоид предназначен для выявления амилоида с конго красным.
Принцип реакции
Амилоидоз - это мезенхимальный диспротеиноз, сопровождающийся образованием в мезенхиме сложного вещества - амилоида. Амилоид представляет собой белково-полисахаридный комплекс, состоящий из F - компонента (фибриллярный белок), P - компонента (плазменный компонент), T -компонента (тканевой).
Амилоид в гистологических препаратах очень похож на гиалин и выглядит в световом микроскопе как бесструктурный, гомогенный, плотный, стекловидный, розового цвета белок.
Микроскопически определяется - а) конго-рот, б) йод-грюн, в) генцианвиолет - окраска основана на метахромазии амилоида.
Реагенты
Набор для микробиологии обеспечивает 50 исследований.
- Раствор конго красного 1 фл (50 мл)
- Карбонат лития 1 фл (0,5 г)
- Гематоксилин 1 фл (50мл)
Оборудование
- Термостат;
- Секундомер;
- Микроскоп;
- рН-метр;
- Цилиндры мерные вместимостью 25-500мл;
- Разделительная воронка;
- Колбы вместимостью 500,1000мл;
- Стаканчики химические;
- Чашки Петри;
- Стеклянные палочки;
- Пипетки;
- Стекла предметные;
- Рельсы для окраски мазков;
- Воронка;
- Бумага фильтровальная;
- Перчатки резиновые.
Подготовка к анализу
Предметное стекло перед исследованием должно быть тщательно вымыто и обезжирено смесью для обезжиривания предметных стекол пр-ва «АБРИС+».
Для фиксации мазков применяют метиловый спирт, ацетон, смесь Никифорова, жидкость Карнуа. Предметное стекло с высушенным мазком погружают в склянку с фиксирующим веществом на 10-15 минут и затем высушивают на воздухе. Возможна фиксация в этаноле или 10% формалине.
Приготовление раствора карбоната лития.
Навеску карбоната лития (реагент 2) растворить в 50 мл дистиллированной воды.
Методика окраски
- Мазок фиксируют в фиксирующем реагенте.
- Тщательно промывают водой.
- Поместить мазок в раствор конго красного - 15-20 мин
- Поместить в раствор карбоната лития - 15 мин
- Дифференцировать 80% этанолом, пока отходят излишки краски.
- Ополоснуть в водопроводной воде.
- Окраска гематоксилином - 10 мин
- Промыть в воде.
Результат окраски
Амилоид окрашивается в красный цвет, ядра - в синий.
Возможна окраска гематоксилином, а затем конго-красным.
Окраску можно проводить как в емкостях для окрашивания, так и на «рельсах».
Меры предосторожности
Меры предосторожности - соблюдение «Правил устройства, техники безопасности, производственной санитарии, противоэпидемического режима и личной гигиены при работе в лабораториях (отделениях, отделах) санитарно- эпидемиологических учреждений системы Министерства здравоохранения СССР», Москва, 1981г.
При работе следует одевать одноразовые резиновые или пластиковые перчатки, так как исследуемые образцы следует рассматривать как потенциально инфицированные, способные длительное время сохранять и передавать ВИЧ, вирус гепатита В, или любой другой возбудитель вирусной инфекции.
Условия хранения и эксплуатации
Хранение реагентов при tº 2-25º С в темном месте.
Для получения надежных результатов необходимо строгое соблюдение инструкции по применению набора.