Только для IN VITRO диагностики!
- Кат.№ 326.1.400 - 400 определений (при конечном объеме 2 мл)
Принцип метода:
В результате реакции между билирубином и диазотированной сульфаниловой кислотой образуется окрашенный комплекс, имеющий максимум поглощения при длине волны 540 нм. Для определения общего билирубина необходима диссоциация неконъюгированного (непрямого, свободного) билирубина, что достигается введением в реакционную смесь кофеина. При определении содержания конъюгированного (прямого, связанного) билирубина кофеин из реакционной смеси исключается. Концентрация неконъюгированного билирубина рассчитывается по разнице концентрации между общим и конъюгированным билирубином.
Исследуемый материал:
Сыворотка крови. Гемолиз недопустим. Хранить в темноте
Состав набора и условия хранения:
- Сульфаниловая кислота - 24 ммоль/л.
- Нитрит натрия - 72 ммоль/л.
- Кофеиновый реагент:
- Кофеин - 240 ммоль/л;
- Бензоат натрия - 250 ммоль/л.
- Физиологический раствор.
- Калибратор - 85,5 мкмоль/л.
Компоненты набора стабильны в течение 12 месяцев при хранении при температуре 18-25°С.
Дата изготовления, серия, номер по каталогу и срок годности указаны на упаковке набора.
Аналитические характеристики набора:
- Линейность - от 2,0 до 270 мкмоль/л.
- Коэффициент вариации - не более 5%.
Приготовление калибратора:
Внести во флакон с калибратором 2,0 мл бидистиллированной воды. После полного растворения концентрация билирубина - 85,5 мкмоль/л. Данный раствор стабилен в течение 5 дней при температуре 2-8°С. Реагент светочувствителен. Хранить в темноте!
Приготовление диазореагента:
Смешать растворы сульфаниловой кислоты и нитрита натрия в соотношении 10 : 1. Диазореагент стабилен 10 дней при температуре 2-8°С в плотно закрытом флаконе в темноте.
Процедура анализа:
1. Определение содержания общего билирубина:
| Поместить в пробирки | Опытная проба, мл | Контроль на реактивы для пробы, мл | Калибратор, мл | Контроль на реактивы для калибратора, мл |
|---|---|---|---|---|
| Диазореагент | 0,55 | --- | 0,55 | --- |
| Сульфаниловая кислота | ---- | 0,5 | --- | 0,5 |
| Кофеиновый реагент | 1,25 | 1,3 | 1,25 | 1,3 |
| Сыворотка крови | 0,2 | 0,2 | --- | --- |
| Калибратор | ---- | --- | 0,2 | 0,2 |
| Смешать и инкубировать при температуре 18-25 °С в течение 20 минут. Измерить оптическую плотность пробы (Епробы) и калибратора (Екалибратора) против соответствующих контролей на реактивы при λ = 540 (500-560) нм и d = 1 см. | ||||
2. Определение содержания связанного билирубина:
| Поместить в пробирки | Опытная проба, мл | Контроль на реактивы для пробы, мл | Калибратор, мл | Контроль на реактивы для калибратора, мл |
|---|---|---|---|---|
| Диазореагент | 0,55 | --- | 0,55 | --- |
| Сульфаниловая кислота | --- | 0,5 | --- | 0,5 |
| Физиологический раствор | 1,25 | 1,3 | --- | --- |
| Кофеиновый реагент | --- | --- | 1,25 | 1,3 |
| Сыворотка крови | 0,2 | 0,2 | --- | --- |
| Калибратор | --- | --- | 0,2 | 0,2 |
Смешать и инкубировать при температуре 18-25 °С в течение 5 минут. Измерить оптическую плотность пробы (Епробы) и калибратора (Екалибратора) против соответствующих контролей на реактивы при λ = 540 (500-560) нм и d = 1 см. |
||||
Расчет:
Диагностическая информация:
1. Общий билирубин.
↑. Повреждение печеночных клеток, обтурация внутри и внепеченочных желчных протоков, гемолитические болезни, физиологическая желтуха новорожденных, синдром Криглера-Найяра, болезнь Жильбера, синдром Дабина-Джонсона, нарушение толерантности к фруктозе, синдром желтухи при грудном вскармливании, гипотиреоз, преходящая семейная гипербилирубинемия у детей.
2.Связанный билирубин
↓. Обтурация внутри и внепеченочных желчных протоков, повреждение печеночных клеток (особенно на поздних этапах болезни), синдром Дабина-Джонсона, синдром Ротора, холестаз.
3.Несвязанный билирубин
↑. Гемолитические состояния или те, которые связаны с разрушением гемоглобина, фаза выздоровления при остром гепатите или сепсисе, преходящая гипербилирубинемия новорожденных, синдром Криглера-Найяра, болезнь Жильбера.
Литература:
- Jendrassik L., et al. Biochem.Z. 1938, vol.297, p. 81.
- Энциклопедия клинических лабораторных тестов (под ред. Н.У.Тица). «Лабинформ», Москва,1997, стр. 84-86.
Параметры программирования:
| Наименование набора реагентов | Билирубин ПРЯМОЙ | Билирубин ОБЩИЙ |
| Тип анализатора (полуавтомат/автомат) | полуавтомат | полуавтомат |
| Метод измерения | КТ | КТ |
| Длина волны, нм | 540 (500-560) | 540 (500-560) |
| Измерение против | бланка пробы | бланка пробы |
| Температура реакции, °С | - | - |
| Фактор | - | - |
| Концентрация стандарта | 85,5 | 85,5 |
| Соотношение реагент/ проба (мкл/мкл) | - | - |
| Количество измерений, не менее | 1 | 1 |
| Время преинкубации, сек | - | - |
| Время реакции, сек | - | - |
| Единицы измерения | мкмоль/л | мкмоль/л |
| Верхний предел реагент бланка, А | 2,00 | 2,00 |
| Нижний предел реагент бланка, А | 0,00 | 0,00 |
| Максимальное DЕ/мин | - | - |
| Границы линейности | 2,0-270 | 2,0-270 |
| Максимум нормы | 3,4 | 21 |
| Минимум нормы | 0 | 5 |
| Подтверждение линейности (да/нет) | нет | нет |