Только для IN VITRO диагностики!
- Кат.№ С 14.5.20 - 5 х 18 мл + 5 х 2 мл
- Кат.№ С 14.5.50 - 5 х 45 + 5 х 5 мл
Принцип метода [1]:
Под действием α-амилазы синтетический субстрат G3СlpNPh (олигосахарид, меченый 2-хлорнитрофенолом) гидролизуется с образованием свободного 2-хлорнитрофенола, имеющего максимум поглощения при длине волны 400-415 нм. Измеренное за единицу времени приращение оптической плотности пробы прямо пропорционально активности α-амилазы в исследуемом образце. Особенностью данного субстрата, отличающего его от других синтетических субстратов α-амилазы, являются одностадийность ферментативного гидролиза и практически идентичная его аффинность к активным центрам различных изоформ α-амилазы, что существенно повышает корректность и воспроизводимость получаемых результатов.
Исследуемый материал [2]:
- Сыворотка крови. Хранить при температуре 2-8ºС не более 30 суток.
- Моча. Образцы нестабильны в кислой среде. Довести рН образца до слабощелочного значения перед хранением. Хранить при температуре 2-8ºС не более 7 суток.
Состав набора и условия хранения:
- Good's буфер, 50 ммоль/л,рН 6,0,
CaCl2 - 2 ммоль/л;
NaCl - 100 ммоль/л. - Субстрат:
G3СlpNPh - 5 ммоль/л;
Компоненты набора стабильны в течение 12 месяцев при температуре 2-8ºС. Дата изготов-ления, серия, номер по каталогу и срок годности указаны на упаковке набора.
Аналитические характеристики набора:
Линейность - от 16 до 1640 МЕ/л.
Коэффициент вариации - 5%.
Приготовление рабочего реагента:
Смешать содержимое флакона с Good's буфером и содержимое флакона с субстратом. Рабочий реагент стабилен не менее 21 дня при температуре хранения 2-8ºС в герметично закрытом флаконе.
Процедура анализа:
Непосредственно перед проведением анализа нагреть рабочий реагент до 37ºС.
λ = 405 нм.
d = 1 см. Температура измерения 37ºС.
Измерение против воздуха.
Компоненты | Вариант 1 , мкл | Вариант 2, мкл | Вариант 3, мкл |
---|---|---|---|
Рабочий реагент | 500 | 300 | 200 |
Исследуемый материал | 10 | 6 | 4 |
Смешать и инкубировать при 37ºС в течение 1 минуты. Измерить ΔЕ/мин в течение 3-х минут. Вычислить среднее значение ΔЕ/мин. Если значение ΔЕ/мин превышает величину 0,200 А/мин развести исследуемый образец физиологическим раствором, повторить анализ, а результат умножить на степень разведения. |
Расчет:
- Сыворотка крови: МЕ/л = 8107x ΔЕ/мин;
- Моча: МЕ/л = 8107 x ΔЕ/мин; или МЕ в сутки = 8107 x ΔЕ/мин х V, где V - объем суточной мочи, л.
Референтные пределы [2]:
- Сыворотка крови - до 220 МЕ/л;
- Моча (случайная проба) - до 1000 МЕ/л.
- Моча суточная - до 900 МЕ/л.
Диагностическая информация [2]:
- Сыворотка крови:
Активность α-амилазы у детей первых двух месяцев жизни низкая; она повышается до уровня взрослых к концу первого года жизни.
↑. Паротит, панкреатит, обтурационная и стронгуляционная непроходимость или инфаркт кишки, эктопическая беременность, перфорация полового органа, заболевания желчных путей всех типов, диабетический кетоацидоз, киста или псевдокиста поджелудочной железы, перитонит, макроамилаземия, некоторые опухоли легких и яичников, почечная недостаточность, эндоскопическая ретроградная холангиопанкреатография, абдоминальная травма, повреждение черепа, вирусные инфекции, состояния после операции, алкоголь.
↓. Недостаточность поджелудочной железы, выраженный муковисцидоз, тяжелое поражение печени, панкреатэктомия. - Моча суточная:
См. Сыворотка крови. Однако, значения могут быть нормальными или пониженными при почечной недостаточности, макроамилаземии. Амилаза в моче может оставаться повышенной в течение 2 недель после приступа острого панкреатита и может предположить образование псевдокисты.
Литература:
- Rauscher E., et al., Ber.Osster.Ges.Klin.Chem. 1981, vol.4, p.150.
- Энциклопедия клинических лабораторных тестов (под ред. Н.У.Тица). "Лабинформ", Москва,1997,стр.21-22.
Параметры программирования
Наименование набора реагентов | α-Амилаза КИН |
Тип анализатора (полуавтомат/автомат) | любой |
Метод измерения | Кинетика |
Длина волны, нм | 405 |
Измерение против | воздуха |
Температура реакции, ºС | 37 |
Фактор | 8107 |
Концентрация стандарта | – |
Объем рабочего реагента (мкл) | 300 |
Объем исследуемого образца (мкл) | 6 |
Количество измерений, не менее | 3 |
Время преинкубации, сек | 60 |
Время реакции, сек | 60 |
Единицы измерения | МЕ/л |
Верхний предел реагент бланка, А | 0,50 |
Нижний предел реагент бланка, А | 0,00 |
Максимальное ΔЕ/мин | 0,200 |
Границы линейности | 16-1640 |
Максимум нормы | 220 |
Минимум нормы | 0 |
Подтверждение линейности (да/нет) | да |