Назначение
Набор реагентов для окраски по Циль-Нильсену предназначен для окраски микроорганизмов (микобактерий туберкулеза)
Принцип реакции
Кислотоустойчивыми называют бактерии, которые после окрашивания фуксином не обесцвечиваются под действием концентрированных минеральных кислот и спиртов. Особенностью этой группы бактерий является их невосприимчивость к красителям, поэтому для их окрашивания применяют подогретые концентрированные красители.
Принцип метода окраски по Циль-Нильсену основан на способности различных микроорганизмов оставаться окрашенным после воздействия спирто- и кислотосодержащими реагентами. Кислотоустойчивость обусловлена особенностями химического состава бактерий.
Наиболее эффективны способы окраски по Циль-Нильсену для выявления спирто- и кислотоустойчивых бактерий, в частности семейства Mycobacteriaceae (микобактерий туберкулеза, лепры и др.) и некоторых простейших (криптоспоридий). Используемые при этом основной фуксин и метиленовый синий позволяют выявить, помимо бактериальной флоры, фуксинофильные внутриклеточные включения, характерные для некоторых вирусных, особенно респираторных, инфекций.
Реагенты
Набор обеспечивает 200 исследований (при расходе 0,5 мл реагента на одно исследование).
- Карболовый фуксин Циля 1 фл (100 мл)
- Солянокислый спирт (концентрат) 1 фл (10 мл)
- Метиленовый синий 1 фл (100мл)
Подготовка к анализу
Предметное стекло перед проведением исследования должно быть тщательно вымыто и обезжирено смесью для обезжиривания предметных стекол пр-ва «АБРИС+».
Полученные мазки тщательно высушивают и затем фиксируют сухим жаром. Фиксация достигается посредством несильного нагревания (примерно до 70°С) предметного стекла, которое для этого трижды проводят над пламенем спиртовки мазком вверх. Можно фиксировать мазки и в 96°спирте (10-15 минут).
Приготовление рабочего раствора солянокислого спирта
Для приготовления рабочего (3%) раствора солянокислого спирта, необходимо во флакон емкостью 100 мл внести концентрат солянокислого спирта (10 мл) (реагент 2) и добавить 90 мл этилового спирта (96º). Раствор тщательно перемешать, хранить в закрытом состоянии.
Методика окраски
- Помещают на мазок полоску фильтровальной бумаги и наносят на фиксированный мазок несколько капель карбол-фуксин Циля (реагент1) и подогревают над пламенем спиртовки до появления паров. Эту температуру поддерживают в течение 1-2 минуты, не доводя до кипения. Охлаждают мазок до комнатной температуры.
- Сливают краску, удаляют фильтровальную бумагу и основательно промывают в водопроводной воде.
- Дифференцируют рабочим раствором солянокислого спирта до тех пор, пока мазок не примет бледно-розовый или бледно-фиолетовый тон (30-60 секунд).
- Промывают в воде 15-30 и более секунд.
- Докрашивают (несколько капель) метиленовым синим (реагент 3) 1-2 минуты.
- Основательно споласкивают в воде и высушивают фильтровальной бумагой.
Мазки, перекрашенные метиленовым синим, можно дифференцировать 70° спиртом.
Окрашенные мазки исследуют в масле, с иммерсионным объективом; при желании заключают в бальзам, в таком случае на окрашенный и хорошо высушенный мазок кладут каплю бальзама и покрывают покровным стеклом.
Результат окраски
Микобактерии окрашиваются в красный цвет на общем голубом или синем фоне.