Только для IN VITRO диагностики!
- Кат.№ 327.2.250 - 250 определений (при конечном объеме пробы 2,6 мл).
Принцип метода [1]:
р-нитрофенилфосфат + Н2О ← Кислая фосфатаза → р-нитрофенол + фосфат
Скорость образования р-нитрофенола, регистрируемая фотометрически при длине волны 405 нм, пропорцио-нальна активности кислой фосфатазы. Активность простатической фракции фермента блокируется тартратом.
Исследуемый материал [2]:
Сыворотка крови.
Состав набора и условия хранения:
- Цитратный буфер, 90 ммоль/л, рН 4,8.
- Тартрат натрия, 20 ммоль/л.
- р-Нитрофенилфосфат, 25 ммоль/л.
- Калибратор - р-нитрофенол, 0,75 ммоль/л
- NaOH, 1 моль/л.
Компоненты набора стабильны в течение года при температуре 18-25*С. Дата изготовления, серия, срок хранения и номер по каталогу указаны на упаковке набора.
Аналитические характеристики набора:
Линейность - до 48 МЕ/л.
Коэффициент вариации - не более 10%.
Приготовление рабочего реагента:
Рабочий реагент №1: смешать цитратный буфер и р-нитрофенилфосфат в соотношении 4:1. Реагент стабилен не менее 20 дней при 2-8ºС в темноте.
Рабочий реагент №2: смешать тартрат натрия и р-нитрофенилфосфат в соотношении 4:1. Реагент стабилен не менее 20 дней при 2-8ºС в темноте.
NaOH, 100 ммоль/л: содержимое флакона №5 развести дистиллированной водой в 10 раз.
Процедура анализа:
1. Определение общей активности:
| Поместить в пробирки | Опытная проба | Контроль на реактивы для пробы | Калибратор | Контроль на реактивы для калибратора |
|---|---|---|---|---|
| Рабочий реагент №1, мл | 0,5 | 0,5 | 0,5 | 0,5 |
| Сыворотка крови, мл | 0,1 | – | – | – |
| Калибратор, мл | – | – | 0,1 | – |
| Вода дистиллиров., мл | – | – | – | 0,1 |
| Смешать и инкубировать в водяной бане при 37 ºС 30 мин | ||||
| NaOH, 100 ммоль/л, мл | 2,0 | 2,0 | 2,0 | 2,0 |
| Сыворотка крови, мл | – | 0,1 | – | – |
| Смешать. | ||||
| λ = 405 (400-420) нм; d = 1 см; Измерить оптическую плотность пробы (Е пробы) и калибратора (Е калибратора) против соответствующих контролей на реактивы. Окраска стабильна не менее 30 минут после окончания инкубации при предохранении от прямого солнечного света. При активности КФ, превышающей 48 МЕ/л, образец следует развести физиологическим раствором. При расчете активности учесть степень разведения. |
||||
2. Определение тартратстабильной активности кислой фосфатазы проводится аналогично оп-ределению общей активности с использованием вместо рабочего реагента №1 рабочего реагента № 2.
Расчет:
Тартратлабильная активность = Общая активность - Тартратстабильная активность
Референтные пределы [2]:
| 1. Общая активность: | мужчины - 2,5-11,7 МЕ/л; |
| женщины - 0,3-9,2 МЕ/л. | |
| 2. Тартратлабильная активность: | мужчины - 0,2-3,5 МЕ/л; |
| женщины - 0-0,8 МЕ/л. |
Диагностическая информация [2]:
- ↑. Карцинома предстательной железы с метастазами в костной ткани (при отсутствии мета-стазов повышение наблюдается не всегда), тромбоцитопении с тромболизисом, гиперпара-тиреоз, лимфобластный лейкоз, прогрессирование болезни Педжета, болезнь Гоше, рак молочной железы. Ложноположительные результаты могут получаться при катетеризации мочевого пузыря, при пальпаторном обследовании предстательной железы, ее биопсии и оперативном вмешательстве, а также при незначительном гемолизе крови.
Литература:
- Andersch M., et al., Amer.J.Clin. Path., 1947, vol.17., p.571.
- Лифшиц В.М., Сидельникова В.И. Биохимические анализы в клинике, Медицинское информационное издательство, Москва, 2001, стр.72-74.
Параметры программирования
| Наименование набора реагентов | КИСЛАЯ ФОС-АЗА КТ |
| Тип анализатора (полуавтомат/автомат) | полуавтомат |
| Метод измерения | КТ |
| Длина волны, нм | 405 (400-420) |
| Измерение против | реагент бланка |
| Температура реакции, ºС – | |
| Фактор | – |
| Концентрация стандарта | 25 |
| Соотношение реагент/ проба (мкл/мкл) | – |
| Количество измерений, не менее | – |
| Время преинкубации, сек | – |
| Время реакции, сек | – |
| Единицы измерения | МЕ/л |
| Верхний предел реагент бланка, А | 2,00 |
| Нижний предел реагент бланка, А | 0,00 |
| Максимальное ΔЕ/мин | – |
| Границы линейности | 0-48 |
| Максимум нормы | 11,7 |
| Минимум нормы | 0,3 |
| Подтверждение линейности (да/нет) | нет |