Назначение
Основным компонентом жировых веществ в гемопоэтических клетках являются фосфолипиды (фосфорсодержащие сложные эфиры глицерина). Они являются составной частью структур цитоплазматической сети, пластинчатого комплекса и используются в качестве энергетического и пластинчатого комплекса и используется в качестве энергетического и пластинчатого материала.
Принцип реакции
Выявление фосфолипидов основано на применении липофильных красителей, растворяющихся и избирательно концентрирующихся во внутриклеточных липидах.
Реагенты
Набор обеспечивает 6 исследований (от 1 до10 стекол за 1 исследование)
Вошедшие в набор:
- спиртовой раствор судана черного Б - 2 фл.
- спиртовой раствор фенола - 2 фл.
- бифосфат натрия кристаллический - 6 фл.
Не вошедшие в набор:
- 40% формалин;
- Спирт этиловый 70º.
- 0,5% раствор красителя Диахим-ГемиСтейн-Р (профессионал)- по Романовскому.
- Вода дистиллированная.
Подготовка к анализу
Получение буферного раствора:
- Растворить навеску фосфата натрия в 25 мл дистиллированной воды.
- Отмерить 7,5 мл спиртового раствора фенола. Соединить с 25 мл раствора фосфата натрия. Раствор сохраняет свои свойства в течение 3 месяцев при температуре 0-+4°С.
Рабочий раствор:
К 30мл спиртового раствора судана добавить 20мл буферного раствора.
Ход реакции
- Высушенные на воздухе мазки крови или костного мозга фиксируют в парах формалина во влажной закрытой камере при t 37°- 10 мин.
- Быстро ополоснуть.
- Просушить фильтровальной бумагой.
- Поместить в рабочий красящий раствор на 1 час.
- Ополоснуть в 70° этаноле 3 сек.
- Быстро промыть проточной водой.
- Докрасить 0,5% раствором краски Диахим-ГемиСтейн-Р (профессионал)- по Романовскому 15-20 мин.
- Быстро промыть, промокнуть фильтровальной бумагой, высушить.
Примечание:
Цитохимические исследования проводят в мазках крови, костного мозга, лейкоконцентрата, спинномозговой жидкости, аспиратах лимфоузлов, селезенки, лейкозных инфильтратах разной локализации.
Мазки крови и костного мозга лучше делать непосредственно из материала, полученного без добавления антикоагулянтов.
При выраженной лейкопении цитохимические исследования целесообразно проводить в препаратах, полученных из лейкоконцентрата венозной крови.
Приготовленные мазки не рекомендуется хранить более 24часов, т. к. активность большинства внутриклеточных ферментов снижается .
Препараты фиксируют сразу после высушивания на воздухе.
Нефиксированные мазки могут храниться в темноте в течение 3 недель.
Результаты окраски
Нормальные величины
Большинство нейтрофилов (69-80%) у здоровых людей красятся интенсивно, 18-36% дают окраску средней интенсивности и 10% слабо окрашены.
СЦК в нейтрофилах 2,65-0,033.
Фосфолипиды обнаруживаются в виде коричнево-черных гранул в клетках гранулоцитарного ряда, начиная со стадии миелобласта. Наиболее богаты липидами зрелые гранулоциты, в цитоплазме которых липиды (суданофильный материал) расположена в основном в перинуклеарной зоне. В моноцитах редкие суданофильные гранулы рассеяны по всей цитоплазме.
В эозинофилах суданоположительное вещество локализуется по периферии специфических гранул, с неокрашенной центральной зоной, реакция в базофилах вариабильна.
Лимфоциты и их предшественники реагируют отрицательно. Также отрицательно реагируют тромбоциты и мегакариоциты и эритробласты. Мегакариоциты изредка могут демонстрировать диффузное окрашивание на фоне которого рассеяны очень мелкие суданофильные гранулы в цитоплазме и над ядром.
Изменения при патологических состояниях
Липиды являются более чувствительным маркером миелоидной дифференцировки. В соответствии с ФАБ-классификацией критериями диагностики острых лейкозов для подтверждения миелоидной природы бластов необходимо выявление 3% и более бластных клеток, положительных по липидам.