Набор реагентов для цитохимического определения сидеробластов и сидероцитов в клетках эритроидного ряда
Сидеробласты и сидероциты - это нормобласты (эритробласты ) и эритроциты, содержащие в цитоплазме негемоглобиновое 2х , 3х валентное железо в виде гранул, окрашиваемых в реакции с берлинской лазурью. Если гранулы свободного железа многочисленные, грубые и располагаются вокруг ядра, образуя кольцо, то такие клетки называются «кольцевидными сидеробластами».
Принцип метода
Использование реакции с берлинской лазурью, основанное на образовании ферриферроцианида при взаимодействие ионов трехвалентного железа с ферроцианидом в кислой среде. Реакция проявляется в виде образования синего или зеленого осадка ферриферроцианида.
Состав набора
- Реактив для фиксации мазков - 1 флакон (100 мл)
- Желтая кровяная соль (20%) - 3 флакона (по10 мл)
- Концентрированная хлористоводородная кислота - 1 флакон (8,2 мл)
- Сафранин (0,1%) - 1 флакон (100 мл).
Приготовление рабочих реактивов
- Реактив №1 и №4 готовы к применению.
- Реактив №2 - содержимое флакона развести дистиллированной водой в 4 раза ( добавить 30 мл дистиллированной воды)
- Реактив №3- 8,2 мл концентрированной HCl довести до 200 мл (полученный раствор имеет концентрацию 0,5 N HCl)
Ход исследований
- Мазки фиксировать в «Реактиве № 1 - для фиксации» 15-20 минут.
- Высушить на воздухе;
- Поместить препараты в смесь равных частей рабочих растворов №2 и №3 при температуре 50-56°С на 15-20 минут;
- Промыть в проточной воде 10-15 минут, затем ополоснуть дистиллированной водой;
- Докрасить реактивом №4 несколько секунд.
Нормальные величины
Содержание сидероцитов в периферической крови не превышает 1,1 % (среднее 0,60 ± 0,04%),
В костном мозге - 0,2-2,1 % (среднее 0,90- 0,09 %).
Содержание сидеробластов в костном мозге составляет 23,7±2,4%.
Истощение запасов железа происходит при железодефицитной анемии и сопровождается снижением количества сидеробластов. Избыточное накопление наблюдается при идиопатическом и приобретенном гемохроматозе, хронической гемолитической анемии, талассемии и МДС, что приводит к увеличению числа сидеробластов. При диагностике МДС отличительным признаком РАКС (рефрактерной анемии с кольцевидными сидеробластами) является присутствие в костном мозге более 15 % кольцевидных сидеробластов.