Назначение набора
Набор предназначен для определения гемоглобина в крови человека гемихромным методом в клинико-диагностических лабораториях и в научных исследованиях.
Принцип метода
Метод основан на превращении гемоглобина крови под действием поверхностно-активных веществ (ПАВ) в низкоспиновую окисленную форму - гемихром, который определяется колориметрически.
Состав набора
Реагент для трансформирующего раствора - 3 флакона по 0,6 г.
Характеристики набора
- Линейность калибровочной кривой - 30 - 200 г/л гемоглобина
- Коэффициент вариации результатов определения - не более 2%
- Число определений - 600 (при расходе трансформирующего раствора 5 мл на одно определение )
- Условия хранения +2 - +25°С
Меры предосторожности
Реактивы, входящие в состав набора, являются безвредными. При работе с контрольными растворами гемоглобина следует соблюдать правила безопасности при работе с кровью.
Приготовление трансформирующего раствора ПАВ
Содержимое одного флакона с реагентом для трансформирующего раствора количественно перенести в мерную колбу объемом 1000 мл и довести объем дистиллированной водой до метки, избегая образования пены. Готов к использованию через сутки после приготовления. Хранить при температуре 18 - 25°С.
Ход определения
В пробирки с 5,0 мл трансформирующего раствора ПАВ (t=18 - 25 °С) внести по 0,02 мл цельной крови, тщательно перемешать и выдержать при комнатной температуре в течение 10 минут для развития устойчивой окраски. Не позднее чем через 60 минут измерить оптическую плотность опытных проб против трансформирующего раствора на спектрофотометре при длине волны 540 нм или фотоэлектроколориметре (зеленый светофильтр) в кювете с толщиной слоя 1 см.
Расчет концентрации гемоглобина в крови
- Расчет концентрации гемоглобина в крови при определении на спектрофотометре или на фотоэлектроколориметре производится по калибровочному графику, построенному с помощью аттестованных контрольных растворов гемоглобина по прилагаемой к ним инструкции.
- Расчет концентрации гемоглобина при определении на спектрофотометре можно производить с использованием величины молярного коэффициента экстинкции гемоглобина и величины молярной (эквивалентной) массы гемоглобина. Тогда расчетная формула принимает вид:
С = (Еоп. х Р х М)/(d х E) = (Еоп. х 251 х 16114)/(1 х 10290) = 393,1 х Еоп.
где
С - концентрация гемоглобина в исследуемом образце крови , г/л
Еоп. - экстинкция опытной пробы
Р - коэффициент разведения крови (251)
М - молярная (эквивалентная) масса гемоглобина (16114)
d - толщина слоя (1см)
E - молярный коэффициент экстинкции гемоглобина в растворе ПАВ (10290)
Нормальные величины
- Для мужчин - 132 - 164 г/л
- Для женщин - 115 - 145 г/л