Только для IN VITRO диагностики!
- Кат.№ 332.1.330 - 330 опр. (при расходе рабочего раствора тимола 3 мл на одно определение)
Принцип метода [1]:
Определение основано на появлении мутности при образовании глобулин-тимол-липопротеиновых комплексов в результате взаимодействия тимолового реактива с сывороткой крови при рН 7,55, имеющей максимум поглощения при l = 630 нм (600-690 нм).
Исследуемый материал:
Сыворотка крови. Гемолиз недопустим.
Состав набора и условия хранения:
- Концентрированный раствор тимола в трис-малеатном буфере - 6,66 ммоль/л;
- Серная кислота - 2 моль/л;
- Хлорид бария - 48 ммоль/л.
Компоненты набора стабильны в течение 24 месяцев при температуре 18-25°С.
Дата изготовления, серия, номер по каталогу и срок годности указаны на упаковке набора.
Аналитические характеристики набора:
- Линейность - до 20 ед. S-H
- Коэффициент вариации - не более 8 %.
Меры предосторожности:
В состав набора входят едкое вещество - серная кислота и вредное вещество - хлорид бария. При работе с ними следует соблюдать правила техники безопасности.
Приготовление рабочего раствора тимола (Рабочий раствор №1):
1-й вариант: в мерную колбу объёмом 500 мл внести 200 мл дистиллированной или деионизованной воды. При постоянном перемешивании внести 7,5 мл концентрированного раствора тимола. Довести дистиллированной или деионизованной водой до метки. Перемещать в течение 10 мин.
2-й вариант: в мерную колбу объёмом 1000 мл внести 400 мл дистиллированной или деионизованной воды. При постоянном перемешивании внести 15 мл концентрированного раствора тимола. Довести дистиллированной или деионизованной водой до метки. Перемещать в течение 10 мин.
Рабочий раствор тимола хранить в плотно закрытой посуде при комнатной температуре в течение 3 месяцев. При появлении осадка фильтровать через бумажный фильтр.
Построение калибровочного графика:
1. Приготовление рабочего раствора серной кислоты (Рабочий раствор №2).
В мерную колбу объёмом 100 мл количественно перенести 5 мл серной кислоты (2 моль/л). Довести до метки дистиллированной или деионизованной водой.
2. Приготовление суспензии сульфата бария (Рабочий раствор №3).
Готовится непосредственно перед построением калибровочного графика.
В мерную колбу объёмом 50 мл внести 1,5 мл хлорида бария (48 ммоль/л). Довести до метки рабочим раствором №2, охлажденным до +10°С. Тщательно перемешать.
3. Приготовление калибровочных растворов и построение калибровочного графика.
Из рабочих растворов №№ 2 и 3 готовят эталоны мутности, соответствующие единицам S-H.
№ п/п | Рабочий раствор№2, мл | Рабочий раствор№3, мл | Единицы S-H |
---|---|---|---|
1 | 4,5 | 1,5 | 5 |
2 | 3,0 | 3,0 | 10 |
3 | 1,5 | 4,5 | 15 |
4 | 0 | 6,0 | 20 |
Смешать и инкубировать 30 минут при температуре 18-25°С. Перед фотометрированием пробы энергично перемешать. Измерить оптическую плотность калибровочных проб против дистиллированной (деионизованной) воды при λ = 630 (600-690) нм и d = 1 см. |
Процедура анализа:
Внести в пробирку | Опытная проба | Контроль на реактивы | Холостая проба (готовится в случае исследования липемичных сывороток) |
---|---|---|---|
Рабочий раствор№1, мл | 3,0 | 3,0 | - |
Сыворотка крови | 0,05 | - | 3,0 |
Физиологический раствор | - | 0,05 | 0,05 |
Смешать и инкубировать 30 минут при температуре 18-25°С. Перед фотометрированием пробы энергично перемешать. Измерить оптическую плотность калибровочных проб против дистиллированной (деионизованной) воды при λ = 630 (600-690) нм и d = 1 см. |
Расчет: Определить помутнение по калибровочному графику.
Если помутнение превышает 20 ЕД. S-H в сыворотке крови, развести исследуемый образец физиологическим раствором в соотношении 1:1, повторить анализ, а результат умножить на 2.
ВНИМАНИЕ: Для приготовления тимолового реактива и для проведения пробы использовать чистую посуду без следов синтетических моющих средств, т.к. они препятствуют развитию преципитата.
Референтные пределы [1]:
0-4 ЕД. S-H
Литература:
- В.Г.Колб, В.С.Камышников, Клиническая биохимия, изд. «Беларусь», Минск, 1976 г., стр.30.